摘要：目的探讨17β-雌二醇通过G蛋白耦联雌激素受体30(GPR30)和PI3K/Akt途径抑制ATDC5软骨细胞线粒体自噬的作用机制。方法用不同浓度的17β-雌二醇、GPR30抑制剂(G15)以及PI3K抑制剂处理ATDC5软骨细胞;应用Western blotting和免疫荧光染色检测ATDC5软骨细胞中GPR30的表达;应用MTT法检测ATDC5软骨细胞的增殖能力和活力;应用Western blotting检测LC-3、TOM20、Hsp60、Akt、mTOR、P38和JNK等自噬标记蛋白和信号关键蛋白的活性改变。结果ATDC5软骨细胞表达GPR30,且10^-7mol/L的17β-雌二醇可以增强GPR30的表达;10^-8mol/L和10^-7mol/L的17β-雌二醇可以减少ATDC5细胞中的自噬体,降低TOM20蛋白的活性;10^-7mol/L的17β-雌二醇可以增强体外培养ATDC5软骨细胞的增殖和活力;10^-7mol/L的17β-雌二醇可以增强自噬标记蛋白Hsp60的活性,但抑制自噬蛋白LC3-Ⅱ的活性;10^-7mol/L的17β-雌二醇可以增加ATDC5软骨细胞中的信号关键蛋白Akt和mTOR的磷酸化水平,对P38和JNK的活性没有影响。结论17β-雌二醇通过GPR30和PI3K/Akt信号通路保护ATDC5软骨细胞免于线粒体自噬。

摘要：目的探讨miR-510对肝细胞癌的调节作用。方法通过基因芯片分析得到肝细胞癌组织与癌旁组织中差异性表达的miRNAs。用实时PCR检测miR-510在肝细胞癌组织与癌旁组织中的表达情况。通过miRDB软件预测miR-510的靶向蛋白,荧光素酶报告基因实验检测HepG2细胞中miR-510对c-MYC的靶向作用。通过Western blotting检测miR-510对HepG2细胞中c-MYC表达的影响。用MTT和Transwell实验检测miR-510对HepG2细胞增殖和迁移的影响。结果基因芯片筛选与实时PCR结果显示miR-510在肝细胞癌中的表达显著低于癌旁组织。miRDB软件分析发现miR-510可以与c-MYC的3’UTR区域结合,荧光素酶报告基因实验发现miR-510与c-MYC可以直接结合。Western blotting显示miR-510可以抑制HepG2细胞中c-MYC的表达。MTT和Transwell实验结果显示miR-510可以抑制HepG2细胞的增殖和迁移。结论miR-510可以通过抑制c-MYC的表达抑制肝细胞癌的发展。